歯学ジャーナル
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概要

酸素誘発性網膜症（OIR）モデルにおける網膜血管を区別するための二重染色法

Ling Xu、Ping Hu、Ye Zhang、Jinyi Long、Xue Wu、Yuhong Ye、Ning Cui、Fei Sun、Xinmin Lu、Jikui Shen、Da Long

目的：本研究の目的は、酸素誘発性網膜症（OIR）マウスの網膜構造血管、新生血管（NV）、および無灌流（NP）領域を区別するための、時間節約、費用対効果、労力節約の方法を改善することであった。

方法： C57BL/6Jマウスを生後7日目（P7）からP12まで高酸素状態（75％±2％ O ₂）に曝露し、その後室内空気に戻すことで網膜新生血管（NV）を最大限に引き起こした。網膜をP17で単離した後、網膜全標本をグリフォニア・シンプリシフォリア・レクチン（GSL）IB4-594およびGSL IB4-FITCで、時間および濃度制御染色法を用いて連続的に染色した。この改良法では2種類の染色媒体のみを使用し、他のブロッキング媒体は不要であった。画像は蛍光顕微鏡で取得し、Adobe Photoshopで合成した。網膜新生血管領域および非灌流領域はImage-Pro Plusで測定した。

結果: 1:100 の濃度の GSL IB4-594 で 45 分間染色すると、ほぼすべての新生血管房を染色することができ、網膜新生血管の信頼性と一貫性のある状態を評価できました。一方、OIR 網膜全標本を 1:100 の濃度の GSL IB4-FITC で一晩染色し、その後 GSL IB4-594 で染色すると、OIR マウスの網膜非灌流領域、構造血管、新生血管房の容易な識別と定量化が可能になりました。

結論:再現性と定量性を備えた網膜二重染色を使用して OIR モデルで NV と NP を評価することは、NV と NP の比率を簡単に計算できる適切な染色法の重要性を示しています。この方法を使用して得られた抗血管新生に対する二重特異性ペプチドの抗血管新生効果の評価などの他の結果は、網膜二重染色を使用して NV と NP の比率を簡単に識別できることの臨床的および科学的研究価値の向上を示唆しています。