トランスクリプトミクス: オープンアクセス
オープンアクセス

概要

大腸菌の解剖とSAK融合ヒトインターフェロンαの精製

ラジ・ガイクワド

大腸菌由来のヒトインターフェロンα（rhIFN α2b）をスタフィロキナーゼ（SAK）結合タンパク質として結合体から効率よく再折り畳みおよび濾過する手法が説明されています。このような結合タンパク質は、表現に特別なコドンを追加する必要がなく、37℃で安定であることがわかりました。再折り畳みの理想的な状態は、凝集を防ぐために他の因子を必要とせずに、柔らかい変性因子を使用することです。SA​​KrhIFN α2b結合タンパク質は、2段階の洗浄を使用して効果的に濾過され、エンテロキナーゼを使用してSAKとIFNの2つの部分に分離されました。両方のタンパク質は、両方の結合パートナーの適切な崩壊により、自然に活性であるように見えました。分離した IFN は、細菌で検出したタグなしフィルター処理 IFN と RP-HPLC で同等の保持時間を示し、Agilent 2100 Bioanalyzer で同等のサブアトミック負荷を示し、エンテロキナーゼ分解後の IFN の正しい調製を示しました。SAK-IFN の発現レベルは、同様の試験条件下でタグなし IFN で観察されたものより 2 倍高いことが確認されました。インターフェロン (IFN) は、感染症、寄生虫、腫瘍細胞などの障害のためにほとんどの脊椎動物の免疫系の細胞によって生成される、細胞を標的とする天然のタンパク質です。これらは、ウイルス感染の重要なマーカーである二本鎖RNAの存在により、さまざまな細胞によって生成される糖タンパク質の大きなグループに属します。その後、IFNの臨床効果が認識され、FDAは、特にrhIFNα2a（ロフェロンA）とIFNα2b（イントロンA）の薬剤を、悪性腫瘍とウイルス性疾患の治療薬として承認しました。インターフェロン療法は、いくつかの疾患、エイズ関連カポジ肉腫、慢性B型肝炎および慢性C型肝炎の治療薬として（化学療法と放射線療法と組み合わせて）使用されています（Remington、1995年）。