応用微生物学: オープンアクセス
オープンアクセス

概要

大腸菌TOP10での大規模生産のためのVP1タンパク質のクローニングと発現

Elham Omer Mahgoub1*、ガラル M. アブデラ

VP1 カプシド遺伝子は、鶏群における鶏貧血ウイルス (CAV) 感染の診断を可能にするタンパク質の発現に不可欠です。本研究では、原核生物発現ベクター pRSET-B が E. coli Top10 で VP1 遺伝子を発現しました。VP1 タンパク質は、E. coli TOP10 で可溶性融合タンパク質として発現しました。VP1 タンパク質の可溶性により免疫原性エピトープが活性化され、50 kDa の抗 VP1 モノクローナル抗体を使用して簡単に検出できます。バッチ発酵プロセスを使用して、E. coli での VP1 タンパク質の生産を拡大しました。その結果、組み換え VP1 タンパク質は、高細菌細胞密度培養中に発現した VP1 タンパク質の収量を増加させることに成功しました。タンジェンシャルフローフィルトレーション (TFF) ステップを使用した場合、透析と脱塩により、VP1 タンパク質画分の比活性と最終収量が増加しました。間接 ELISA 検査と市販の ELISA 検査の統計計算により、間接 ELISA 検査は、溶液の量が少なく、コストが低く、特異性が高いため、市販の検査と競合できることが示されました。開発された間接酵素結合免疫吸着測定法 (ELISA) を使用して、バッチ発酵細菌培養で発現した VP1 タンパク質を抗原として検査し、感染鶏の CAV に対する抗体を検出しました。