抗ウイルス薬および抗レトロウイルス薬ジャーナル
オープンアクセス

概要

哺乳類細胞株における全長および細胞外ドメインEBOV糖タンパク質の組み換え型のクローニング、発現および精製

ミサキ・ワイェンゲラ、ピース・バビリエ、キャロル・ムスビカ、サミュエル・キリムンダ、モーゼス・L・ジョロバ

背景:全長エボラウイルス糖タンパク質 (GP) は、最も外側の脂質膜に散在してスパイクを形成し、そこでウイルスと宿主細胞の相互作用を媒介します。GP の分泌型 (sGP) も、既知の 5 つのエボラウイルス種すべてによって生成されます。これらの特性により、GP はエボラウイルスの研究開発 (R and D) の理想的なターゲットとなり、汎フィロウイルスを標的とした迅速診断テスト (RDT)、バイオ治療薬、ワクチンの開発にも役立ちます。組み換えザイールエボラウイルス( EBOV ) GP のこれまでのクローニングには、主に昆虫 (バキュロウイルス) 発現システムが使用されていました。本研究では、哺乳類細胞株における組み換え EBOV GP の全長および細胞外ドメイン (ECD) 型のクローニング、発現、精製について報告します。

方法と結果: EBOV GPの完全長およびECD型の669および643アミノ酸残基に対応する2034および1956塩基対(bp)のコードDNA配列をpTGEプラスミドにサブクローニングした。組み換えpTGEプラスミドを使用して、血清を含まないFreeStyleTM 293 Expression Mediumで増殖させた293-6E HEK哺乳類細胞にトランスフェクトした。細胞溶解物および/または培養上清を使用して精製タンパク質を取得し、SDS-PAGEおよびウェスタンブロットで分析した。精製された完全長GPは、ウェスタンブロットで推定分子量約100 kDa(Cal.MW約71.67 kDa)の膜結合タンパク質として細胞溶解物中に検出され、0.02 mgのGP(濃度: 0.2 mg/mL、純度: 約50%)が得られた。一方、ECD GP は細胞培養液の上清中に検出され、SDS-PAGE およびウェスタンブロットに基づくと分子量は約 116 kDa と推定され、1.6 mg (濃度: 0.4 mg/ml、純度: 約 70%) の GP_ECD が得られました。

結論:哺乳類細胞内では、組み換え全長 EBOV GP は主に膜貫通タンパク質 (tGP) として発現し、ECD GP は培養培地に溶出されます。両方の組み換え形態の GP は、迅速診断テスト (RDT) の研究開発に不可欠です。