歯学ジャーナル
オープンアクセス

概要

線維柱帯細胞における制御可能なウロキナーゼ遺伝子発現

津田芽生、金子志保、安藤晶、西村哲也、奥田愛鷹恵美子、伊藤誠司、田尾本真、松村美代、高橋寛治

目的：緑内障は進行性視神経症の一種で、最終的には眼圧（IOP）の上昇に伴って失明に至る。房水流出路を形成する線維柱帯（TM）および近小管結合組織における細胞外マトリックスの蓄積は、IOP上昇の主な原因である可能性があり、したがって線維素溶解系はIOPの調節に関連している可能性がある。我々は、制御可能なウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子（uPA）遺伝子のTM細胞への導入の可能性を検討した。
方法： TM細胞は、ブタの眼から新鮮に分離され、ヒトTM細胞は線維柱帯切除術中に得られ、培養された。ヒトTM細胞から全RNAを抽出し、cDNAに逆転写した。次に、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）法を実行して、uPAの遺伝子発現を検出した。ヒト uPA の cDNA を発現ベクター (pEYFP-N1 ベクター) と制御発現ベクター (TRE-Tight ベクター) にサブクローニングし、各ベクターを培養ブタ TM 細胞に個別にトランスフェクトしました。培養培地にドキシサイクリンを添加して、pTet-ON ベクターと TRE-Tight ベクターを活性化しました。最後に、酵素結合免疫吸着法 (ELISA) を使用して uPA の発現を調べました。
結果: ELISA の結果、pEYFP-N1 ベクターを使用してヒト uPA 遺伝子をトランスフェクトした培養ブタ TM 細胞の培地で uPA (3.5 ng/ml) が発現していることが明らかになりました。ドキシサイクリンは、ヒト uPA 遺伝子を共トランスフェクトした TM 細胞とともに、pTet-On ベクターと TRE-Tight ベクターで用量依存的にヒト uPA を誘導しました。
結論: Tet-On システムを使用することで、近位小管結合組織の細胞外マトリックスを分解する可能性のある uPA の TM 細胞への制御可能な遺伝子導入が実現しました。この方法は、緑内障の新しい治療法として役立つ可能性があります。