細胞科学と治療のジャーナル
オープンアクセス

概要

マウスの精子形成過程におけるC-Kitトランスジーン構造の設計と分子特性解析

スワナンド・コリ、アルン・P・シカールワール、ムラリ・R・バブ、レディ・KVR

出生後の精巣では、未分化のA型精原幹細胞（SSC）がc-Kitの存在下でB型精原細胞（SGC）に分化します。c-Kitは、哺乳類の精子形成中に細胞/段階特異的に発現します。c-Kitは、生殖細胞だけでなく、造血幹細胞やメラノサイトの発生にも不可欠であるため、厳密な転写制御を受けています。c-Kitの発現は動的に制御されるプロセスですが、精子形成中の転写制御の分子的基盤はほとんど不明のままです。本研究の目的は、Wv/Wv変異マウスから単離したc-Kit陰性SSCにc-Kit発現トランスジーン構築物を導入すると、受容マウスの精巣で分化して定着するかどうかを調べることです。この目的のために、4.4 kb の c-Kit-ORFGFP 発現カセットを含む 7.4 kb の pG1-Kit-ORF-GFP トランスジーン コンストラクトを設計し、その in vitro 発現を免疫蛍光法およびフローサイトメトリー分析によって確認しました。結果を比較するために、1.1 kb (c-Kit プロモーターと ORF の両方を欠く)、4.1 kb (c-Kit プロモーターを欠く)、および 1.4 kb (c-kit-ORF を欠く) の 3 つのコントロール GFP コンストラクトも設計し、エレクトロポレーション (EP) によって SSC に導入しました。これらの SSC は、生殖細胞移植 (GCT) アプローチを使用して、ブスルファンで治療した不妊レシピエントマウスの精巣に網を介して導入されました。c-Kit-ORF-GFP トランスジーン インサートを運ぶ SSC は、コントロールと比較して、レシピエントマウスの精細管でコロニー形成し、他の生殖細胞系統に分化できることが観察されました。結論として、精巣 Wv/Wv 変異マウスには SSC 集団があり、c-Kit シグナル伝達機能が損なわれていますが、c-Kit-ORF-GFP トランスジーン挿入の導入により、受容体不妊マウスの SSC 機能が回復できることを初めて報告します。したがって、今回の発見は、精巣不全患者の生殖生理学の理解と将来の新しい治療法の可能性に大きな影響を与える可能性があります。