農業科学と食品研究ジャーナル
オープンアクセス

概要

バナナバンチートップウイルス検出のためのラピドット免疫測定法の開発

ナムラタ ND、ナラヤン BM、チョーガル A、チダナンド AR

BBTV は、ファージディスプレイ技術を使用して単鎖フラグメント可変 (scFv) 抗体を生成するための抗原として使用されました。モノクローナル ELISA で最高の読み取り値を示した 2 つのクローン、すなわち pBSNMAB5 と pBSNMAB40 が選択されました。pBSNMAB5 と pBSNMAB40 の単鎖抗体フラグメントは、scFv モノクローナル抗体フラグメントおよびアルカリホスファターゼ (PhoA) 酵素をコードする遺伝子と転写的に融合できる pQUANTa 本体発現ベクターにサブクローニングされました。クローンは、LMB3 フォワードプライマーと pHEN リバースプライマーを使用して配列決定され、特性が調べられました。両方のクローンの scFv 遺伝子は 795 bp の長さで、同様の相同配列を共有していることがわかりました。 BLASTn および BLASTx 分析の結果、合成構築抗 TNF アルファ単鎖 Fv 抗体遺伝子、部分的 cds との相同性が 85 パーセントであることが示され、さらに BLASTx 分析では循環 B 細胞抗体重鎖可変領域 (Homo sapiens) との相同性が 86 パーセントであることが示されました。クローンの発現時に、pBSNMAB5 および pBSNMAB40 モノクローナル抗体とともに ALP の融合タンパク質が生成されました。scFv-ALP コンジュゲートは BBTV タンパク質に対して生成されました。この抗体コンジュゲートを使用して、検出キットが開発されました。この Rapidot 免疫診断キットは、NC 膜と膜カセットの両方で 0.9 g/ml という低濃度の BBTV を検出し、BBTV に対して生成されたモノクローンの特異性を評価するために他のタンパク質とクロスチェックも行いました。