応用薬学ジャーナル
オープンアクセス

概要

カプシカム・アヌム L-グルタミナーゼの単離、動態およ​​び in vitro 抗白血病活性

モハナド・アドレス、モハメド・サリム、アーシア・エル・ハッサン

この研究は、他の非選択的化学療法剤とは異なり、癌細胞の代謝を選択的に標的とする抗白血病薬として、青唐辛子から単離された天然の L-グルタミナーゼの開発の可能性を探ることを目的としています。これは、L-グルタミナーゼの比活性と活性の最適条件を決定し、続いて部分精製と in vitro 細胞毒性アッセイを行うことで行われました。L-グルタミナーゼの活性は、液体窒素で均質化し、0.05 M ホウ酸ナトリウム緩衝液 (pH 8.5) で抽出した後、ネッスラー法で果実の水抽出物で測定されました。結果は、総タンパク質 1 mg あたりの L-グルタミナーゼ活性が 18.7 U/mg であることを示しました。唐辛子の果実から抽出された粗 L-グルタミナーゼの触媒活性の最適条件を研究しました。結果によると、L-グルタミナーゼの最大活性は、pH 7.2 のリン酸緩衝生理食塩水の存在下で、酵素を 250 mM の L-グルタミンとともに 37°C で 30 分間インキュベートしたときに達成されました。L-グルタミナーゼの最大速度 (Vmax) と親和定数 (Km) は、それぞれ 14.1 mM と 90.2 mM でした。粗 L-グルタミナーゼは、20% から 80% 飽和度の範囲で 7 つの異なる濃度の硫酸アンモニウムを使用して塩析することによって精製されました。精製された L-グルタミナーゼの比活性は、50% 硫酸アンモニウム溶液で塩析したときに 18.7 U/mg から 98.5 U/mg に増加しました。この結果は、精製技術としての硫酸アンモニウム沈殿の効率が高いことを示しています。抗白血病特性の評価は、MTT アッセイにより L-グルタミナーゼとドキソルビシン、およびそれらの組み合わせの THP-1 細胞株に対する細胞毒性を比較することによって行われました。結果は、酵素単独 (60.28%) と比較して、酵素とドキソルビシンの組み合わせの場合に 72.75% の阻害率で顕著な抗癌活性を示しました。これらの知見から、青唐辛子の L-グルタミナーゼは唐辛子に多く含まれ、精製が容易で、ヒト単球性白血病細胞に対して顕著な細胞毒性があるため、抗白血病剤として開発できると結論付けられました。