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概要

Immunohistochimie multiplexe : l'importance de l'ordre de coloration lors de l'élaboration d'un protocole validé

Jihad Syed, Jack Ashton, Jésuite Joseph, Gemma N Jones, Christian Slater, Alan Sharpe, Garry Ashton, William Howat, Richard Byers, Helen K Angell

Objectif : La complexité des maladies multifactorielles, telles que le cancer, pose des défis importants au développement de thérapies personnalisées. L'analyse histologique numérique intégrée des tumeurs permet de mieux comprendre le microenvironnement immunitaire et la relation pronostique associée au dénombrement et à la distribution de sous-populations spécifiques de lymphocytes infiltrant la tumeur (TIL). À cet effet, le marquage cellulaire multiplex, associé à l'imagerie multispectrale (MSI), est une approche de plus en plus utilisée pour obtenir un phénotypage et une quantification in situ plus précis des TIL. Cependant, ces approches nécessitent une validation complète avant leur utilisation, ce qui est l'objectif fondamental de cette étude.

Méthodes : Des coupes entières et des microarrays de tissus riches en lymphocytes ont été utilisés pour développer et valider un protocole d'immunofluorescence multiplex (IF) pour l'interrogation simultanée par MSI de jusqu'à six antigènes de cellules immunitaires d'intérêt ; CD3, CD8, FOXP3, CD20, PD-L1 et PD1. La concordance entre l'immunohistochimie chromogène monoplexe (IHC) et la coloration par immunofluorescence monoplexe (IF) a d'abord été obtenue. Par la suite, l'effet de la position dans un ordre d'IF multiplex pour un anticorps donné a été étudié, comprenant l'impact de l'encombrement stérique de l'anticorps et les conditions de décapage de l'anticorps.

Résultats : Dans les méthodes où le multiplexage est activé en utilisant la récupération d'antigènes pour éliminer les anticorps antérieurs, le principal facteur de composition influençant la validation du test multiplex était l'effet non linéaire et non uniforme des temps prolongés de récupération d'épitope induite par la chaleur (HIER), à mesure que les anticorps progressent dans l'ordre dans un protocole multiplex.

Conclusion : Cette étude démontre la fidélité de la coloration multiplex comme représentative de la coloration simplex, l'effet de l'ordre de coloration des anticorps, et offre un cadre pour la génération de protocoles d'immunofluorescence multiplex optimisés.