ウィルソン・ルイス・マンダラ1
免疫刺激に対する細胞性反応は、炎症部位に局在することが多く、多くの細胞タイプが関与しています。これらの反応は、発現するサイトカインのタイプに基づいて、単一細胞レベルで機能的に特徴付けることができます。単一細胞レベルで抗原特異的細胞反応を測定する能力は、疾患の病因の研究からワクチンの評価まで、幅広い潜在的用途を持つ重要なツールです。この研究では、健康なマラウイの成人参加者から採取した血液サンプル中のリンパ球と単球によるin vitroサイトカイン産生を刺激するための最適条件と、さまざまなサイトカインと細胞タイプの最適染色条件を確立するために、いくつかの実験が行われました。最適条件を確立するために、さまざまな刺激方法と条件、さまざまな培養チューブとインキュベーター、さまざまな抗体標識条件が評価されました。
PMA とイオノマイシンの併用により、最高のサイトカイン産生 T 細胞が生成されたのに対し、サイトカイン産生単球には LPS の方が優れた刺激剤でした。全血の刺激は、T 細胞では 5 時間で最適でしたが、単球では 4 時間で最適でした。BFA はモネンシンよりも優れたゴルジ遮断薬であることが判明し、静止状態で 15 ml ファルコン型ポリプロピレンチューブを使用すると、最高の割合のサイトカイン産生細胞が検出されました。T 細胞は主に TNF-α、IFN-α、IL-2 を産生し、単球は主に TNF-α と IL-6 を産生することが判明しました。2 µl の抗 CD3-PerCP、2 µl の抗 CD14-APC、4 µl の抗サイトカイン-PE で最良の結果が得られました。他の量と比較して、2ml の FACS 溶解液を使用した場合に、最も高いサイトカイン産生単球が検出されました。これらの最適条件は、ICS を使用してサイトカイン産生細胞の割合を決定する上で不可欠です。