アルコール依存症と薬物依存のジャーナル
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概要

クローン化されたヒト遺伝子を用いたチャイニーズハムスター肺細胞変異体におけるミトコンドリア遺伝子発現の回復

ザキ・A・シェリフとキャロリン・W・ブルーム

背景: Gal-32 はチャイニーズハムスターの肺細胞核の変異体であり、ミトコンドリアタンパク質合成の欠陥によりガラクトース中で増殖することができません。Gal-32 遺伝子の産物は未知であったため、表現型補完を利用して Gal-32 変異を修正するヒト遺伝子をクローン化することが不可欠でした。

結果:劣性 Gal-32 細胞は、pSV2-neo プラスミド DNA と、優性ヒト Gal+ 遺伝子および pSV13 ベクターに存在するクロラムフェニコール耐性 (camr) 遺伝子を含むヒトゲノム ライブラリからの組み換え DNA で共形質転換されました。一次形質転換体は、ガラクトースおよびネオマイシン類似体 G418 で増殖させることによって選択されました。ヒト Gal+ 遺伝子を救済するために、一次形質転換体 DNA と pCV108 コスミド ベクターでゲノム ライブラリが構築されました。camr 遺伝子は、近くのヒト配列を持つクローンを識別するために使用されました。2 つの camr、Alu ハイブリダイズ クローンからの DNA は、劣性 Gal-32 細胞を Gal+ 表現型に変換し、ミトコンドリアのタンパク質合成を回復することができました。

結論:これらのデータは、チャイニーズハムスターの Gal-32 変異を補完し、ガラクトース代謝を回復するヒト遺伝子を含む 2 つの pCV108 形質転換組換えクローンの分離を示しています。