医学診断法ジャーナル
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概要

最終段階の DNA 断片化の有無にかかわらず精製されたヒト精子間の相互比較研究を用いた精子クロマチン分散試験とコメットアッセイの再検証

金子 悟*、高松 潔

目的:精子クロマチン分散検査 (SCD) とコメットアッセイ (CA) の原理と定量的性能を再検証するための相互比較研究を実施する。

方法:末期断片化の顆粒断片のない、または顆粒断片のあるヒト精子を正常精子精液から精製し、自然発生の陰性対照および陽性対照 (それぞれ NC および PC) として使用しました。SCD と CA は両方とも、2.0 mol/L NaCl、1.0 mmol/L DTT で核タンパク質を抽出しました。SCD は、DNA 損傷が紫色のハローの面積に反比例すると判定しました。CA は、いわゆる彗星尾と呼ばれる顆粒断片の数から電気泳動によって DNA 損傷のレベルを推定し、それらの電気泳動特性をシングルセルパルスフィールドゲル電気泳動 (SCPFGE) と比較しました。

結果: SCD の紫色のハローは、照射された DNA 繊維に付着したクリスタル バイオレット (CV) 染色可能な核タンパク質で構成されていることが判明しました。SCD は NC と PC を区別できませんでした。残留核タンパク質は、天然 CA での DNA の移動をブロックしました。対照的に、ゲル内トリプシン消化による SCPFGE は、伸長した DNA 繊維を超えて繊維状および顆粒状の断片を排出しました。アルカリ CA は、0.3 mol/L NaOH で DNA を流しました。DNA は顆粒状の断片に細断されましたが、残留核タンパク質は DNA への結合能力を保持し、新たに生成された断片を固定しました。

結論: DNA 断片化分析では、分離された運動精子の断片化の初期段階を測定する必要があり、タンパク質分解の欠如により中性およびアルカリ性 CA の定量的パフォーマンスが低下します。全体的に、結果は、SCD と CA は臨床統計のデータを収集するツールとしては感度が不十分であることを示唆しました。