歯学ジャーナル
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概要

ヒト角膜内皮細胞分離の標準化とヒト角膜内皮細胞の足場としての皮ヒト羊膜の使用

カルパナ・スレッシュ、アラン・マシュー・パンヌース、サラ・クルヴィラ、タンヴィ・カンナ

目的:ヒト角膜内皮細胞 (HCEC) の分離を標準化、剥離したヒト羊膜 (HAM) を分離した HCEC の足場として使用すること。 方法
:ヒト羊膜を 1.2 単位/ml のディスパーゼ II を使用して 37 ℃で60その間剥離し、続いて機械的に掻き取られた。角膜内皮およびデスメ膜シートを、外科手術に適さないヒトドナー死体眼から剥がし、2mg/mlのコラーゲナーゼII溶液を使用して37℃、5 % CO2 で 2 時間酵素消化しました。分離した細胞を含む培養培地に再懸濁し、コーティングされていない培養容器に 4 プレイティング後、非連続細胞をゼラチンコーティングした皿または成長因子を添加したOptiMEM培養地中剥脱羊膜上に播種した。細胞は顕微鏡で隣接性と多角形形態を分析した。
結果：剥離羊膜の顕微鏡検査では上皮細胞の残骸は見られなかった。クラスター化浮遊し、プレプレーティングにより線維芽細胞を含まない内皮細胞の分離が促進された。分離された細胞のうち少数は羊膜上に足場を形成し、その後の培養地交換時にその継続を維持し
た。酵素ディスパーゼIIを使用したHAMの長期処理により膜が剥がし、採取した角膜内皮細胞の足場として有効にする機能。 このアプローチは、内皮細胞増殖のための費用対効果の高い代替手段として、また角膜組織工学研究のためのin vitroモデルとしてさらに研究される可能性があります。