人類学
オープンアクセス

概要

ℇ34ファージテールスパイクタンパク質：in vitro特性評価、構造予測、S. newington LPSとの潜在的相互作用、および動物細胞株に対する細胞毒性評価

ジョセフ・A・アヤリガ、ローガン・ギルディア、ホンジュアン・ウー、ロバート・ヴィラファネ

ℇ34 ファージは、サルモネラ ニューイントンを宿主とするポドウイルス科ファージ（短い非収縮性の尾部バクテリオファージ）のメンバーです。このファージは、細菌宿主のリポ多糖類（LPS）とその尾部スパイクタンパク質（TSP）間の特定の相互作用を介して、宿主の感染を開始します。ℇ34 TSP は、TSP が十分に特徴付けられている P22 ファージと構造的に類似しており、機能的に同等であり、両方のファージの電子顕微鏡写真は区別がつきません。S . typhimuriumの O 抗原と複合体を形成した P22 ファージ TSP の結晶構造が決定され、TSP の活性部位は受容体結合ドメインの残基 Asp392、Asp395、および Glu359 であることが実証されています。 ℇ34 ファージの系統学的近縁種である E15 と呼ばれる別のファージでは、α-Gal-Man-Rha 繰り返し単位からなる短い多糖が E15 ファージとSalmonella anatum のLPS 間の相互作用に関与し、ファージが細菌に吸着されます。ℇ34 ファージに関する研究では、サルモネラ ニューイントンのLPS の O 抗原多糖成分と相互作用することが示されています。この多糖は、β-ガラクトシル結合によって結合されたマンノシル-ラムノシル-ガラクトース繰り返し単位で構成されています。ただし、LPS 結合と加水分解に関与する ℇ34 TSP の特定の残基に関するデータは存在しません。

この研究では、テールスパイク遺伝子をベクター pET30a-LIC にクローニングし、拡張 ℇ34 TSP (Eℇ34 TSP) と呼ばれる融合タンパク質として発現させました。熱、SDS、プロテアーゼに対する耐性に基づいてタンパク質を特徴付け、タンパク質が耐熱性であること、SDS 勾配の存在下で異常な電気泳動移動度を示すこと、P22 ファージの頭部に活発に結合して P22 宿主に感染できないハイブリッドファージを形成することを示しました。また、コンピューターによる研究により、ℇ34 TSP がALA250、SER279、ASP280 残基を介して宿主の O 抗原に結合して加水分解することを実証しました。