歯学ジャーナル
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概要

2次元差動ゲル電気泳動（2D-DIGE）により、ヒト線維柱帯細胞内の架橋アクチンネットワークに関連するタンパク質が明らかになった。

ジャクリーン・Y・ベルムデス、ハンナ・C・ウェバー、ガウラン・C・パテル、リアン・ジュン・ヤン、アボット・F・クラーク、ウェイミン・マオ

背景：原発開放隅角緑内障（POAG）の主な危険因子は、眼圧（IOP）の上昇です。POAG患者では、線維柱帯（TM）を通した流出抵抗が異常に上昇しています。TMにおける重要な緑内障関連病理学的変化の1つは、過剰な架橋アクチンネットワーク（CLAN）の形成です。CLANは、合流した緑内障TM細胞および組織に見られる網状の多角形構造です。緑内障関連因子であるTGFβ2（形成成長因子ベータ2）およびグルココルチコイドは、非緑内障TM細胞（NTM）におけるCLAN形成を誘発します。CLANは細胞の硬度を高め、恒常性を変化させ、それによってIOPの上昇に寄与する可能性があります。

方法: CLAN 関連タンパク質を同定するためにプロテオームアプローチを使用しました。コンフルエントな初代 NTM 細胞を 0.1% エタノール (EtOH、媒体)、100 nM デキサメタゾン (DEX)、または 5 ng/ml TGFβ2 と 0.1% EtOH で 7 日間処理して CLAN を誘導しました。細胞骨格を含むトリトン不溶性画分を抽出し、2 次元差動ゲル内電気泳動 (2D-DIGE) を行いました。質量分析 (MS) を使用して、2D ゲルで差次的に発現したタンパク質を同定しました。同定されたタンパク質と CLAN の共局在は、免疫細胞蛍光 (ICF) 顕微鏡を使用して確認しました。

結果: 2D-DIGE により、両治療群で 103 種類の発現が異なるタンパク質が明らかになりました。MS では、最も濃縮された 23 種類のタンパク質が特定されました。ICF では、カルデスモン、カルポニン、ミオシン軽鎖、およびトロポミオシンが CLAN と共存していることが示されました。

結論: DEX または TGFβ2 誘導による CLAN 形成を伴う NTM 細胞で異なる発現を示すタンパク質のサブセットを特定しました。これらのタンパク質が CLAN 形成および/または維持に関与している可能性については、さらに調査する必要があります。これらのタンパク質は、緑内障の病因に関する新たな知見をもたらす可能性があります。