ISSN: 2329-6674
ヴォスカリデスK
未知の DNA 変異の検出は、原子科学のさまざまな分野で重要な課題の 1 つです。このため、サンガー シーケンシングが日常業務に使用されています。ただし、大規模な DNA または多数のサンプルを検査する必要がある場合、この方法は困難で、コストがかかり、時間がかかります。最近では、次世代シーケンシング (NGS) がさまざまな目的の変異テストに使用されています。この大規模なシーケンシング技術は、ゲノム サイズのテストや、若年性糖尿病 (MODY) などの類似の疾患を引き起こす特性のリストの検査に適しています。一度に十分なサンプルが収集される場合、NGS は、テストをプールすることでテストあたりの実行コストが削減されるため、魅力的で魅力的なシステムです。ただし、1 回のテストで 10 ~ 50 kb の DNA 配列を検査する必要がある場合は、効率的で便利なテスト手法が必要です。一般的に、一本鎖変異多型 (SSCP) とヘテロ二本鎖分析 (HA) は、この目的のために最も一般的に使用される手法でした。しかし、これらの手法の感受性は、徹底的な試験には適していませんでした。PCR ベースの変異スクリーニング手法の多くの代替法が発表されましたが、感受性が低いか潜在的に負荷が大きいため、どれも普及しませんでした。HA の 2 つの代替法、変性角ゲル電気泳動 (DGGE) と温度角ゲル電気泳動 (TGGE) は、ゲルの密度または温度を変更することで、ゲル内のヘテロ二本鎖 DNA の移動遅延を改善するために開発されました。これらの手法は HA よりも優れている可能性がありますが、ゲルの実行または作成に特別な機器が必要です。そのため、これらの代替法は、最初の HA ほど普及していません。変性エリート流体クロマトグラフィー (DHPLC) は、電気泳動を含まないポータブル トランスフェクション アッセイの一種で、代わりに HPLC セグメント内のヘテロ二本鎖の保持期間の短縮に基づいて変異を識別します。この新しい技術は高い感受性を実現しますが、最大の感受性を得るには、各 DNA グループの変異検出条件を時間をかけて改善する必要があります。理想的な変異検出技術には、従来のハードウェアと試薬のみが必要です。単一のプロトコルをあらゆる DNA グループと変異タイプに適用でき、高い感受性、高いスループット、および優れたコストパフォーマンスを実現します。複合変異切断 (EMC) は、おそらくこれらの基準を満たしています。