酵素工学
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概要

インド産の大型コイ、Catla catla (Catla) 由来のリパーゼの分離、精製、二次構造の特性評価および速度論的研究

カメシュワル シャルマ YVR、ニーリマ ブーラ、プラシディ チャギ

リパーゼは、水脂質界面で脂肪を脂肪酸とグリセロールに加水分解する触媒作用を及ぼし、非水性媒体中では反応を逆転させる遍在する酵素です。リパーゼは、油脂化学、有機合成、洗剤配合、栄養学における新規かつ多様な用途により、生体触媒の中でも重要な位置を占めています。リパーゼは、カトラカトラ (カトラ) の消化管と消化管から抽出および単離されました。組織は、開始緩衝液 (0.01 M TrisHCl、pH 7.2) で 1:3 の比率でホモジェナイズされました。このようにして得られた粗抽出物は、硫酸アンモニウム (20-80%) を使用して沈殿させました。過剰な塩は透析によって除去され、得られた透析液 (脱塩酵素) は、イオン交換クロマトグラフィー用の DEAE セルロースカラムに流速 0.5 ml/分でかけられました。溶出は、開始バッファー中の NaCl (100-800 mM) の段階勾配によって行われました。活性画分は精製画分 (PF) としてプールされ、pH、温度、および酵素活性に対するカルシウムの影響の物理的特性、構造特性、分子特性、および速度論的研究に使用されました。精製画分 (PF) は、1438.72 U/mg の最終比活性を示しました。最適 pH は 7.8 で、最適温度は 20 ℃ でした。融点 (Tm) 値は 42 ℃ で、精製リパーゼの活性化エネルギーは 34.82 KJ/mol/K でした。リパーゼの熱安定性は 20 ℃ であることがわかりました。リパーゼ活性は、開始バッファー中の 10 mM および 20 mM の CaCl2 で 3 時間までインキュベートしても保持されました。これは、カルシウムが酵素の変性を促進する特性を持っていることを示しています。インド産の大型コイ catla 由来のリパーゼによる pNPP の加水分解に対するミカエリス・メンテン定数 (Km) は 6.695 mM でした。リパーゼ (catla) の回転数 (kcat) は 0.0022 s-1 でした。リパーゼの触媒効率 (kcat/Km) は 0.0003412 s-1 mM-1 でした。精製リパーゼ (PF) の SDS-PAGE では、分子量 70 kDa の均一な単一バンドが示されました。円二色性を用いた精製リパーゼの α ヘリックスおよび β ストランドの二次構造配置は、それぞれ 48.51% および 9.74% でした。