酵素工学
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概要

磁性担体への固定化によるシクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼの再利用

ケイト・クリスティーナ・ブランコ、フランシスコ・ホセ・ドス・サントス、ナタリア・ソッツァ・ベルナルディ、ミゲル・ジャフェリッチ・ジュニオール、ルーベンス・モンティ、ジョナス・コンティエロ

ブラジルのサンパウロ州のキャッサバ製粉工場の廃水から分離された Bacillus lehensis 由来の CGTase は、硫酸アンモニウム沈殿法を用いて部分精製された後、固定化された。部分精製された CGTase は、3-アミノプロピルトリメトキシシランでシラン化し、グルタルアルデヒドで活性化したマグネタイト支持体上に共有結合により固定化され、その結果、収率は 16.27%、最終活性は初期活性の 17.54% となった。Bacillus lehensis 由来のシクロデキストリン グリコシルトランスフェラーゼの物理化学的性質と速度論を測定した。固定化 CGTase の最適温度は、可溶性酵素の最適温度 (それぞれ 70°C と 55°C) よりも高かった。固定化酵素の最適 pH は、可溶性酵素の最適 pH と同じ (pH 8.0) であった。 pH および熱安定性試験では、酵素活性は 24 時間後に 50%、160 分後にはそれぞれ初期活性の 26.22% が維持されました。ミカエリス・メンテン定数は 0.82 mg.ml-1、最大速度は 45.45 mol.ml−1.min−1 でした。固定化酵素の 4 サイクル後の再利用研究では、初期触媒活性の 16.66% が維持され、マグネタイトに固定化された酵素を回収して再利用できることが実証されました。